1、标记反应溶液

2、10mM NHS-dPEG4-Biotin配方

3、超滤管

二、抗体超滤处理

标记前需要应用截留分子量为50kDa 的超滤柱对抗体进行标记前纯化处理(如果不是抗体，一定要按蛋白分子量来确定超滤柱截留分子量)，以除去蛋白样品中可能含有的叠氮钠、BSA、甘氨酸、Tris或其他任何有自由氨基的添加物，防止干扰标记反应。

具体操作步骤：

1、于超滤柱中加入200μl 标记反应溶液，加入500ug 单克隆抗体，混匀。

2、4℃，6000rpm，离心2min。弃滤液。

3、于超滤柱中加入100μl 标记反应溶液，混匀。4℃，Max 14000×g，2min。

4、重复步骤2 6到7次。

5、混匀超滤柱中的残留的液体，室温静置1min。

6、将超滤柱反转倒置于一新的超滤管中，4℃，1000×g，2min，收集滤液。

7、取50μl PBS于超滤柱中混匀，静置1min。

8、倒置超滤柱，4℃，6000rpm，2min。收集滤液，与步骤6的滤液合并，4℃放置备用。用标记反应溶液调节抗体浓度到2mg/ml（0.25ml）。

三、生物素标记抗体

1、计算抗体标记需要生物素用量。 

2、超滤后的滤液加入NHS-PEG4-Biotin溶液，室温反应1h。

3、葡聚糖凝胶分离纯化(去除游离生物素)

4、葡聚糖凝胶分离纯化标记抗体操作步骤