化学多肽修饰:炔基修饰多肽,叠氮修饰多肽,PEG修饰多肽,多肽的荧光标记
发布时间:2023-11-27 分享至:
目前多肽标记及修饰的内容非常多,广泛应用在多肽药物,多肽生物学,多肽抗体以及多肽试剂的研究中。目前应用广泛的有:非放射性核素标记(C13,H2),荧光标记(FAM,FITC),生物素标记,磷酸化修饰等。
荧光标记由于没有放射性,实验操作简单。因此,目前在生物学研究中荧光标记应用非常广泛,荧光标记方法与荧光试剂的结构有关系,对于有游离羧基的采用的方法与接肽反应相同,也采用HBTU/HOBt/DIEA方法连接。但是对于FITC标记,需要在连接FITC前,增加一个氨基己酸,避免在切割的过程中被TFA切割掉。
如何选择合适的荧光标记基团取决于您的实验需求。
药理学实验研究基本分为体内研究和体外研究两大类。
对于体内研究,一般选择发射波长在650-900nm的荧光基团,例如:ICG、Cy5.5和 Nile Blue。这是因为这类基团所发出的荧光具有较好的组织穿透能力,受背景干扰较小(水、血红蛋白和脱氧血红蛋白一般都会产生背景干扰吸收,其区域在560nm左右)。
对于体外研究,发射波长在400到600nm的荧光基团***为常用,例如:AMC、FITC和TAMRA。
荧光标记的多肽在现代医学中的应用是很广泛的。例如:用Cy5.5标记的目标多肽研究对 c-Met受体的绑定作用。有人设计含有KSLSRHDHIHHH序列的cMBP,其C端为GGGSC, C端Cys用 Cy5.5-Maleimide标记其巯基侧链。研究结果表明:上述Cy5.5-cMBP多肽与U87MG肿瘤细胞共孵24小时后,具有较高的癌细胞摄取值,其响应浓度在纳摩尔级别。
多肽保存
为了防止或尽量减少多肽降解,请将多肽以冻干粉形式保存在-20°C,-80°C更佳。如果需要保存溶液肽,***好分成小样存放,以避免反复冻融。一份样品融冻后未用完,应扔掉。细菌降解有时会成为溶液肽的麻烦,所以请将肽溶于无菌水或肽溶液过滤除菌。
多肽保存方法建议
所有的冻干多肽产品可以在常温下避光运输,并可以在室温条件下保存几天或者少于一个星期,多肽性状是稳定的。所有的冻干多肽产品,都必须保存在干燥低温的条件下,以-20℃的低温为佳,若有条件***好保存在-80℃以下,在这样的条件下大多数多肽可存放1-2年。
当需要使用多肽产品时,应在开盖之前将多肽产品升至室温;对保存于-20℃的产品,该过程需要1h或更长,因包装大小而异。否则,当打开瓶盖时,水气进入会导致多肽凝缩而降低其稳定性。一旦打开,应迅速称量完毕,并立即密闭以免潮解,亲水肽尤其应注意。
对序列中含有Cys、Met、Try的易氧化多肽和含有Gln、Asn、Asp的易降解多肽,应避免反复融冻,以免多肽被氧化和降解,因此建议分装成小包装保存。需要多少解冻多少,用后弃去,不要保存。
对于暂时不用的多肽,不要以溶液的形式保存(即使在-80°C的条件下)。