准备工作：

首先我们用不同的活性基团的Cyanine菁染料和相应的活性基团的生物分子或小分子药物发生反应，链接到一起。

Cyanine3 NHS ester和带NH2的药物分子连接

Cyanine7 maleimide和带SH的药物分子或生物分子连接

Cyanine5 amine和带NHS的药物分子或小分子连接

Cyanine5.5 azide和Cyanine3.5 alkyne用于连接DNA和oligonucleotides

Cyanine3/5/7-药物分子或小分子多肽用于小鼠活体成像实验

实验步骤如下：

SPF级 BALB/C裸鼠，6～8 周龄, 18～20克, 实验前24 h 自由进食、饮水。

于实验裸鼠腹腔内注射2%戊巴比妥钠300μL(215 mg/ kg)麻醉动物。将裸鼠俯卧位平放于小动物多光谱活体成像系统的记录暗箱中。

实验时将Cy7 或Cy7 标记的生物分子或药物DMSO 稀释后,于裸鼠尾静脉注射200μL( 0.5 mg/g) [***佳用量和时间需要客户根据自己的仪器和药物试剂等条件优化] ,每5min 记录1张动物在体内发射荧光的成像图片,分析荧光药物的分布情况。对照鼠不注射药物，进行同时记录。记录结束后迅速解剖裸鼠的心、肝、脾、肺、肾等脏器，进行成像。

Cy7 检测时激发波长700～770 nm 带通 ,发射波长790 nm 长通。液晶可调谐滤光片扫描范围 780～950 nm ,扫描步进10 nm。曝光时间为500 ms。

不同的药物代谢时间不一样，注射入裸鼠体内，荧光立即分布全身，然后逐步向膀胱聚集，呈现显著的肾排泄的特点一般4~6 小时，快得只有30 分钟;如果是骨骼等部位靶点的Cy7 标记药物，有客户反映一周后活体成像系统仍能检测到荧光成像。

器官切片观察：将解剖的器官迅速放置于4%多聚甲醛固定4 小时以上，0%，20%，30%PBS 蔗糖依次沉底，20μm 切片，多聚赖氨酸洗过的载玻片贴片，晾干，DAPI 染色。共聚焦显微镜观察，激光器为氦氖 633 nm。