常规多肽的固相合成方法,看一遍就能自己合成简单的肽段
发布时间:2023-12-12 分享至:
本文章介绍固相多肽合成***常规的步骤,技术性偏简单,做为参考。
一、树脂溶胀
称量取代度为1.0mmol/g的0.6g CTC Resin,将树脂放入反应管中,加DCM(大致15ml/g),振荡30min。假如选用的时其它树脂,通常会提前将***个氨基酸与树脂连接好,如Fmoc-Leu-Wang Resin,溶胀后直接进行第三部 脱保护操作。
二、缩合***个氨基酸
通过沙芯抽滤掉溶剂,加入3倍摩尔过量的Fmoc-Leu-OH,加入少量DMF溶解,再加入6倍摩尔量的DIPEA,***后加入 2.85倍摩尔量缩合试剂HBTU,鼓氮气0.5h。使用DMF洗涤3-4次,去少量树脂(大约20多颗树脂即可)进行茚三酮检测,为无色。
三、脱保护
加15ml 20%哌啶/DMF溶液(15ml/g),5min,去掉再加15ml20%哌啶DMF溶液(15ml/g),15min。使用DMF洗涤5次,去少量树脂(大约20多颗树脂即可)进行茚三酮检测,为蓝色(或其他颜色)。
四、以此类推重复第二和第三步骤,***后用甲醇洗树脂3次,并抽干。***终得到流沙状的树脂肽,例如:H2N-Gly-Arg(Pbf)-His(Trt)-Ile-Leu-CTC Resin。
五、切割
具体操作见多肽切割一文,已有很详细介绍。
六、补充:
一般采用茚三酮检测,加热温度为 110℃左右,加热时间为3min。其溶液配比也有很多种,实验者可以多尝试一下。