藻红蛋白PE标记抗体方法：

藻红蛋白PE是从红藻中分离纯化的，能发出强烈的荧光，具有很好的吸光性能和很高的量子产率，在可见光谱区有很宽的激发及发射范围。

1、藻红蛋白的预处理

藻红蛋白冻干粉用纯化水溶解，浓度调整到 5-10 毫克/毫升为宜。

2、藻红蛋白的衍生化

将琥珀酰亚胺-4-(N-甲基马来酰亚胺)环已烷-1-碳酸酯)(SMCC)溶解于无水二甲基亚砜（DMSO）配制成 10毫克/毫升的母液，每毫克的藻红蛋白添加11微升的琥珀酰亚胺-4-(N-甲基马来酰亚胺)环已烷-1- 碳酸酯)(SMCC)，铝箔封好后于室温旋转反应60分钟，使藻红蛋白分子上的氨基与琥珀酰胺反应生成衍生化的藻红蛋白。

交换缓冲液预先平衡凝胶层析柱，将衍生化的藻红蛋白过柱，收集藻红蛋白峰。

3、抗体的处理

二硫苏糖醇（DTT）溶解于蒸馏水中，配制成1摩尔/升的二硫苏糖醇（DTT）母液，调整抗体的浓度，使其浓度至少为4毫克/毫升。

每毫升抗体溶液中加入20微升的二硫苏糖醇（DTT）母液，室温静置反应40分钟，将抗体的二硫键打开形成巯基。

交换缓冲液预先平衡凝胶柱，将反应液过柱，收集抗体部分。

4、藻红蛋白和抗体的共价交联

每毫克抗体加入3.2毫克的琥珀酰亚胺-4-(N-甲基马来酰亚胺)环已烷-1-碳酸酯)(SMCC)衍生化的藻红蛋白，铝箔封好后于室温旋转反应60分钟，使藻红蛋白分子上的马来酰亚胺基和抗体上的巯基实现共价交联。

10毫克的N-乙基马来酰胺（NEM）溶解于1.0毫升的无水二甲基亚砜（DMSO）中制成N-乙基马来酰胺（NEM）母液（现配现用）。

每毫克抗体中加入3.4微升N-乙基马来酰胺（NEM）母液，铝箔封好后于室温旋转反应60分钟，反应后，使抗体上的巯基封闭。

5、交联物的存储

将交联物于存储缓冲液中透析后保存于2-8℃。