多肽标记常用荧光染料FITC

荧光染料标记技术是一种常用于示踪和检测生物分子的重要工具。活性荧光染料通常用于标记蛋白质、核酸和其他生物分子，用于生命科学应用，包括荧光显微镜、流式细胞术、荧光原位杂交(FISH)、荧光共振能量转移(FRET)技术、受体结合分析和酶分析。羧基荧光素在使用前必须要被激活，与之相比异硫氰酸荧光素(FITC)更具活性，FITC主要是与巯基或者伯氨反应，如还原型半胱氨酸的侧链，尤其是多肽或蛋白中的氨基。

在很多应用中，荧光基团可以在化学合成的过程中引入，在选择性地去掉保护基团后，FITC可以与赖氨酸(Lysine)或鸟氨酸(Ornithine)侧链反应，或者与在合成过程中的多肽N端氨基反应。在N端标记时，在氨基和异硫氰酸盐反应形成的硫脲键之间会引入一个烷基间隔基，如氨基己酸(Ahx)。

为什么要引入一个烷基间隔基呢?

多肽合成后需要在酸性条件下从树脂上切割下来，在这种条件下N端FITC标记的多肽会产生一个环化的反应形成荧光素，随后***后一个氨基被去除，而像Ahx这样的间隔基引入后就可以避免这样的反应。 有时候空间位阻是使用间隔基的主要原因，这样多肽和FITC就可以没有障碍的偶联。 Ahx或者b-Ala均可作为间隔基用于FITC标记的多肽上 。