影响FITC标记多糖反应效率的因素是什么?

用荧光染料标记多糖，多采用化学合成法,通过多糖上的特征结构，应用化学方法,将荧光染料结合到多糖上。已知有多种荧光物质可以通过多糖特征性还原末端同其发生反应，例如CY系列花菁荧光染料、ICG吲哚菁绿系列荧光染料、罗丹明等。然而标记过程中发现,多糖结构不同,单糖组成不同,都会影响标记效率。总的来说结构复杂、空间复杂、成分复杂的多糖荧光标记反应效率低，不容易被标记。

多糖是维持生命活动不能缺少的一种生物大分子，是自然界中存在的生命物质之一，虽然大家都知道多糖的结构对它的生物学活性有着至关重要的影响，但是由于多糖本身结构中不含能发光的基团，且结构复杂，导致多糖的进一步研究一直困顿不前。故而有的科研人员想到用可发光的荧光物质对多糖进行标记，再利用相关仪器进行追踪和检测。

荧光物质是一种吸收紫外线或者可见光之后可以把短波长的光转为较长波长并且显现出较为鲜艳颜色的一种化学合成物，其中又以荧光素类染料、罗丹明类染料，Cyanine系列花菁染料较为常见。异硫氰酸荧光素(FITC)就是荧光素类染料的其中一种，发射波长为520 nm，是目前常用的荧光标志物;可以与-OH、-COOH、-NH2 -N3等常见基团结合，用来标记缺少易于检测的的发光基团的多糖，以供开展对多糖的检测和追踪。

利用多糖的还原末端与异硫氰酸荧光素(FITC)进行反应予以揭示影响FITC标记多糖的反应效率的因素。首先对多糖进行FITC荧光标记，再比较不同结构，不同单糖组成，分子量不同的多糖对标记效率是否有影响。

先将多糖与酪胺反应,然后再与异硫氰酸荧光素(FITC)反应。对多糖与酪胺化合物与荧光反应中的反应时间、反应温度、pH、和酪胺用量进行了单因素考察。280nm的吸收峰表示多糖与酪胺的结合;450nm的吸收峰表示与FITC的结合。