试剂家简介流式荧光技术原理及其检测方法
发布时间:2022-12-20 分享至:
流式荧光检测技术,也称为液相芯片技术或微球体悬浮芯片。液相芯片体系是由许多大小均一的圆形微球(直径5.5-5.6 pm)构成,每种微球上对应一个单独的荧光编码,利用仪器(如Luminex xMAP 100/200)对微球进行检测和结果分析。
技术原理
其核心技术是把微小的聚苯乙烯小球(5.6μm)用荧光染色法进行编码(即通过2种荧光燃料对微球染色,调节这2种荧光染料的比例可获得100种不同颜色的微球),然后将每种颜色的微球交联上1种针对某个检测物的特定生物探针。应用时,先把针对不同检测物的编码微球混合,再加入微量待检样本,在悬液中靶分子与微球表面交联的探针进行特异性结合,在1个反应孔里可同时完成多达100种不同的化学反应。用100激光流式仪鉴定微球颜色以判断结果,同时通过靶物质上的报告分子完成反应的定量分析。由于分子杂交或免疫反应是在悬浮溶液中进行的,所以其检测速度较快,可在1个微量液态反应体系中同时检测100个指标。
检测方法
1将荧光标记后的单细胞(或颗粒)悬液进入吸样管,进而随鞘液进入流动室,进入流动室之前的管道变细,迫使鞘液从四周、样本在中心进入流动室,在外加压力的作用下由下向上(或由上向下)直线流动;
2鞘液充满流动室将样品裹挟,当二者通过流动室喷嘴流出时,压力迫使鞘液包裹的液滴包含单一细胞或颗粒垂直通过检测区;
3在检测区与液滴垂直的位置设置激光,在与激光垂直的位置设置探测器(透镜等),液流、激光、探测器互相垂直并聚焦于一点实现流体动力聚焦。