试剂家简介——FITC荧光素标记抗体五大方面及其应用
发布时间:2023-01-11 分享至:
FITC异硫氰酸荧光素是较为常用的标记抗体的方法,FITC一般呈黄色、褐色或褐黄色粉末或结晶,性质稳定在低温中能保存数年。
在流式细胞术的细胞免疫学检测及免疫分型等实验中,各种荧光素标记抗体是必不可少的。荧光素的选择和搭配,通常会从以下5个方面进行考虑:
01流式细胞仪的配置
仪器需配备可激发相应荧光素的激光管;对于多荧光素实验,仪器可同时检测多种细胞荧光。
02染料的亮度与抗原表达量相适应
低表达量的抗原,推荐使用高亮度荧光素;高表达量的抗原,推荐使用低亮度荧光素。
03荧光素之间的光谱重叠小化
尽量选择光谱重叠小的荧光素组合,如FITC/PE-Cy7;选择不同激光激发的荧光素组合,如FITC/APC、PE/APC。
04避免复合染料联合使用带来的假阳性
常见的复合染料有PE-Cy5、PE-Cy5.5、PE-Cy7、PerCP-Cy5.5、APC-Cy7等,复合染料的信号衰退会降低APC或PE的灵敏度。
05尽量使用红色激光激发自发荧光高的样本
每种细胞群都有不同水平的自发荧光。所有的荧光通道均可观察到自发荧光,但自发荧光强度在波长较长时迅速降低。对自发荧光较强的细胞,选择红光激发,发射波长长的荧光素(如APC)可得到较好的S/N比值;对自发荧光比较弱的细胞,发射波长长的荧光素对S/N提高没有明显的改善,可选用FITC。
FITC标记抗体应用
1.免疫荧光技术
2.酶联免疫吸附(ELISA)
3.放射免疫测定
4.免疫印迹(western blot)