商家活动

首页 / 资讯信息 / 商家活动

试剂家简析-免疫荧光技术(immunofluorescence techniques)

发布时间:2023-01-13 分享至:

免疫荧光技术该法是以荧光素,如异硫氰酸荧光素(fluorescence isothiocyanate,FITC)、罗丹明等标记抗体或抗原,以检测标本中抗原或抗体的方法。免疫荧光技术也包括两种基本类型,即荧光抗体染色(fluorescentantiboby technique)和荧光免疫测定(fluorescein immunoassay)。

荧光抗体染色

是用荧光抗体浸染可能含有抗原的细胞或组织切片,若有相应抗原存在,则抗原与荧光抗体结合而使荧光素不被洗脱,在荧光显微镜下可见发光的物体,从而达到定位检测目的。根据荧光抗体的不同可分直接法和间接法,前者即用荧光标记的抗体直接检测标本片上的抗原,如某些蛋白质成分等;后者则在未标记的相应抗体处理标本片后,覆以荧光标记的抗球蛋白抗体(第二抗体),借此可检测多种抗原与抗体。与直接法相比,间接法需标记一种第二抗体即可适应多种抗原抗体系统的检测,且敏感性较高。

荧光免疫测定

本法与酶免疫测定一样,可分均相和非均相法。均相法常利用荧光的某些特性,如荧光的激发、吸收、猝灭等设计试验,无需作结合的与游离的标记物分离。双标记法即为均相荧光免疫测定的一种类型,检测试剂为FITC标记的抗原和罗丹明标记的抗体,当两种标记物标记的抗原和抗体特异性结合后使两种荧光素靠近,由于FITC的发射光谱能被罗丹明吸收,从而使FITC的荧光明显减弱。试验时将可能含有抗原的标本与两种标记物一起反应,则能与FITC标记的抗原竞争结合罗丹明标记的抗体,从而减少罗丹明对FITC发射光谱的吸收。通过FITC荧光测定可推算出标本中抗原的量,其与荧光强度成正比。非均相法限于实验室条件、试剂和容器或载体的非特异性荧光干扰等。