试剂家总结分享抗体荧光标记的选择
发布时间:2023-01-30 分享至:
抗体是机体组织在感受到特定外来物质时由浆细胞(效应B细胞)分泌、被免疫系统用来鉴别及中和外来物质的蛋白质。而荧光标记抗体,即使用荧光素进行抗体偶联,用于流式细胞分析。
抗体荧光标记的选择:
1如果实验中检测单一指标:
不同荧光标记在不同的仪器上强度不同。以FACS Calibur仪器为例:PE>APC>PE-Cy5>PerCP>FITC>PerCP-Cy5.5,通常来说,PE较强,适用于弱表达抗原。FITC强度较弱,适用于强表达抗原,使用范围比较广。使用时需根据检测的目标蛋白进行具体选择。
2如果同时检测多个指标:
确认流式细胞仪能检测多少个通道:流式抗体每个通道只能选择一种荧光素,且各个通道之间的荧光素可以随意搭配。
3常用荧光标记:
FITC、PE、APC、PerCP-Cy5.5等。
抗体荧光标记的方式:
抗体荧光标记的方式包括直接标记和间接标记两种。在流式实验过程中,减少实验工序和过程,以保证实验的真实和准确性。因此在条件允许的范围内,尽量用直接标记的抗体进行实验而不去做间接标记。
荧光标记抗体的应用:
荧光标记抗体目前主要应用于细胞周期、细胞凋亡、细胞增殖/活力研究,细胞信号转导,新陈代谢等领域的研究,典型应用为MSC鉴定和免疫学流式分析。