生物素（Biotin）又称维他命B7，是维他命B群中的一员，主要为人体中多种碳酸酵素的辅因数，是脂肪酸合成、糖质新生、分解氨基酸等过程不可缺的营养素，对于产生能量非常重要。

生物素化试剂（Biotinylation reagents）分为三大类：

伯胺反应性生物素化试剂（Amine biotinylation reagents）

巯基反应性生物素化试剂（Sulfhydryl biotinylation reagents）

羰基反应性生物素化试剂（Carbonyl biotinylation reagents）。

基本的标记步骤为：

称取2mg NHS-Biotin，加入590µl DMSO，混合均匀，现配现用。2.将需要活化的抗体溶于1ml 1XPBS中，一般浓度为2mg/ml的抗体加入溶解好的活化试剂26.6µl（可根据样品浓度适当增减），混合均匀，室温孵育30min或4度2h。3.采用脱盐柱脱盐或透析去除未反应的活化试剂。

化学法生物素标记注意事项：

1.依据抗原或抗体分子所带可标记基团的种类（氨基或巯基）以及分子的酸碱性，选择相应的活化生物素和反应条件。

2.标记反应时，活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当的比例。

3.为减少空间位阻影响，可在生物素与被标记物之间加入交联臂样结构。

4.生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后，尽量不影响后者的免疫活性。