生物素化试剂——伯胺反应性生物素化试剂
发布时间:2023-02-13 分享至:
伯胺生物素化试剂基于水溶性分为两组:NHS-酯(NHS-esters)和磺基-NHS-酯(Sulfo-NHS-esters)。
NHS-酯NHS-esters特点:
蛋白质标记-生物素化抗体或其它蛋白质,用于检测或纯化;
细胞内标记-膜渗透性,可用于标记细胞内部;
胺反应性-与伯胺(-NH2)反应,例如赖氨酸的侧链或N端伯胺;
溶解性-水不溶性,必须溶解在DMSO或DMF中,然后在水溶性缓冲液中进一步稀释。
磺基-NHS-酯Sulfo-NHS-esters特点:
蛋白质标记-生物素化抗体,用于固定、纯化或检测;
细胞表面标记-不穿透质膜,仅生物素化细胞的表面蛋白;
胺反应性-与伯胺(-NH2)反应,例如赖氨酸的侧链或N端伯胺;
溶解性-易溶于水,可用于不能耐受有机溶剂的应用。
伯胺反应性生物素化试剂的应用:
NHS-SS-biotin标记细胞表面蛋白
NRG1诱导神经元中的ErbB内化。细胞表面蛋白在4℃下用NHS-SS-biotin标记,然后在37℃下进行ErbB受体内化。表面蛋白上的剩余生物素在孵育后通过谷胱甘肽除去。将对照和NRG1刺激的神经元裂解,并用链霉素磁珠纯化内化的生物素化蛋白。