巯基反应性生物素化试剂分为两大类：生物素-HPDP（Biotin-HPDP）和碘乙酰基-LC-生物素（Iodoacetyl-LC-Biotin）。 

生物素-HPDP Biotin-HPDP的特点：

1.蛋白质标记-生物素化抗体或其它蛋白质；

2.巯基反应性-与巯基（-SH）反应，例如半胱氨酸（C）的侧链；

3.吡啶基二硫醇活化-在pH6.5至7.5的缓冲液如PBS中反应；

4.可逆-形成二硫键，其可以使用DTT或其它还原剂切割；

5.溶解性-水不溶性，必须溶解在DMSO或DMF中，然后在水溶性缓冲液中进一步稀释。

碘乙酰基-LC-生物素 Iodoacetyl-LC-Biotin的特点：

1.蛋白质标记-生物素化抗体或其它蛋白质；

2.细胞内标记-膜可透过，可用于标记细胞内部；

3.巯基反应性-与巯基（-SH）反应，例如半胱氨酸（C）的侧链；

4.碘乙酰激活-反应在pH7.5至8.5的Tris或硼酸盐缓冲液中避光进行；

5.不可逆-形成永久性硫醚键，间隔臂不能被切割；

6.溶解性-水不溶性，必须溶解在DMSO或DMF中，然后在水溶性缓冲液中进一步稀释。

巯基反应性生物素化试剂的应用：

在链霉素-琼脂糖上纯化用Biotin-HPDP标记的蛋白质，随后进行2-ME洗脱，用nNOS对NR2A（N-甲基-D-天冬氨酸受体2A亚基）进行内源性S-亚硝基化。对来自野生型和nNOS -/ -小鼠的脑裂解物进行S-亚硝基化测定，蛋白质用biotin-HPDP标记并在链霉素-琼脂糖上纯化生物素化的蛋白质，然后用2-ME洗脱。