生物素合成技术路线及其应用总结
发布时间:2023-02-27 分享至:
生物素又名维生素H 、辅酶 R 等。生物素是一个脲基环含有一个硫原子和一条戊酸的侧链,现已知有8种异构体。生物素为无色的针状结晶,易溶于水,微溶于冷水,能溶于乙醇,但不溶于有机溶剂。对热稳定,一般烹调损失不大,强酸、强碱和氧化剂可使其破坏,紫外线也可使其逐渐破坏。
生物素技术路线
通过生物素标记纯化的蛋白质是实现蛋白质捕获、固定化和功能化以及多聚化或桥接分子的有效方法。化学生物素化通常会产生异质产物,其功能可能受损。本文介绍的是利用生物素连接酶 (BirA)将生物素共价连接到 15 个氨基酸的AviTag 肽,实现对跟AviTag融合蛋白复合物的下拉,该法不同于lncRNA在体外的生物素标记,可以实现在细胞里面。
生物素应用
将AVI与dCas9融合,再辅以BirA的表达,针对感兴趣的基因组位置设计sgRNA,通过高亲和力链霉亲和素纯化分离基因组位点相关的大分子。通过基于质谱 (MS) 的蛋白质组学和高通量测序对纯化的蛋白质、RNA 和 DNA复合物进行鉴定和分析,分别用于研究天然顺式调节蛋白、RNA和远程DNA相互作用。