生物素(Biotin)也称维生素H、D-生物素，分布于动、植物的组织中，是一种维持机体自然生长、发育和机能健康必要的营养素。由于生物素与亲和素之间高亲合力的牢固结合以及多级放大效应，在科研中被应用。

生物素是一个分子量只有244.31Da的小分子，分子式为C10H16N2O3S，分子有两个环状结构，其中Ⅰ环为咪唑酮环，是与亲和素结合的主要部位；II环为噻吩环，C2上戊酸侧链的末端羧基是结合抗体和其他生物大分子的***结构，经化学修饰后，生物素可成为带有多种活性基团的衍生物—活化生物素。活化生物素可与蛋白、抗体等生物大分子结合，并且大分子的生物活性不会受到破坏。

一般一个蛋白质分子可以被多个生物素标记，标记反应时为了减少生物素对抗原-抗体结合过程中的空间位阻影响，活化生物素与待标记抗原、抗体应有适当的比例，一般标记IgG时，生物素与IgG用量比(mg：mg)宜为1:5~1:10，被标记IgG浓度调到2~20mg/mL为宜。而且标记的蛋白初始缓冲液***好是pH 7.4的PBS，缓冲液里不能含有胺类试剂、有氨基的蛋白，如Tris、甘氨酸、BSA，因为这些试剂会抑制标记反应。如果缓冲液里含有上述试剂，则需将该蛋白溶液在4℃下于pH 7.4的PBS透析过夜(BSA很难被透析除去)。被标记的抗体中若含有甘油、蔗糖，也应当透析除去(注意在透析过程中抗体溶液体积会变大)。