N3-PEG-ConA/BSA/HAS/TF,叠氮Azido标记糖蛋白的过程

以N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酸为单体，Br-B-CD作引发剂进行自由基聚合。对所得聚合物进行高密度的三苯基磷和辣根过氧化物酶双功能化修饰,从而得到可特异性识别叠氮标记蛋白质且具有高负载量固定化辣根过氧化物酶的新型“化学抗体”试剂。

叠氮糖标记HeLa细胞:

HeLa细胞培养在37℃培养箱中，待密度合适后将培养基倒掉，用PBS清洗3次，加入20 uL (5.2 mg 的叠氮糖加入242 L的 DMSO，贮备液的终浓度是50 nmol/uL〉叠氮糖在10 mL高糖培养基中代谢培养72h(叠氮糖的终浓度为100 uM)。

72h后使用10 mL PBS清洗3次，去除多余的叠氮糖。然后直接加入少量的胰酶消化细胞，37℃消化5 min，消化完成后加适量含血清的培养基以终止反应，用移液管吸取培养基反复吹打培养皿壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液，接着用移液管将含有细胞的培养基转移至15 mL离心管中,1000 r/min离心 3 min,去掉上清,并用PBS反复3次离心清洗去除胰酶等杂质，用1 mL的PBS一起转入ep管中。14000 g 离心5 min去除上清。加入0.5 mL8M尿素（UA）裂解液，混匀，冰上超声(2s，2 s，5次）提取蛋白，超声完后14000 g离心10 min，取上清，得到叠氮标记的蛋白。

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