N3-PEG-HRP，Azido叠氮修饰聚乙二醇-辣根过氧化物酶的荧光猝灭过程

研究了辣根过氧化物酶 (HRP)和叠氮化钠 (NaN3 )作用前后的荧光光谱变化。探讨了HRP的荧光猝灭机制 ,运用了HRP的荧光猝灭行为确认了HRP和NaN3 之间生成了配合物。计算了HRP和NaN3 之间生成的配合物的形成常数为 7 9×108L·mol-1,结合位点数为 1。研究还发现 ,NaN3 与HRP的结合 ,影响了分子构象 ,使酪氨酸和色氨酸残基的微环境受到不同程度的影响。

在滴定过程中，处于缓冲体系中的HRP在344 nm主要是色氨酸残基的贡献的***大荧光发射峰被猝灭。随着滴定的进行，在314 nm附近出现了一个次强峰，它主要是酪氨酸残基贡献的。从图中还可以看出，随着N3的加入HRP的荧光强度一直呈下降趋势，并且伴随着红移现象。

用Finnpipette可调式移液器移取磷酸盐缓冲液2 980pumol加人试管，用微量注射器加入HRP(5.970 pumol·L-1 )20 uL;按照[NaN3]/[HRP]=0:1，1∶8，1∶4，1∶2，1∶1，2∶1，4∶1，8:1，16∶1，32:1的比例将 50 pmol·L-1 NaN3。溶液用微量进样器分次加入盛有HRP的缓冲液中、混匀，15 min后测量。采用的激发波长为280 nm，在300~480 nm范围内测定荧光光谱:固定激发和发射波长差为20和80 nm，扫描得到不同物质的量比时属于酪氨酸和色氨酸残基的荧光光谱。

试剂家主要经营的产品:磷脂、共聚物、PEG衍生物、PEG小分子、点击化学、荧光标记、生物素、光敏剂、金属骨架、量子点、上转换，合成定制产品:脂质体、多肽、荧光探针、大环化合物、交联剂、介孔材料、四氧化三铁、纳米微球、无极发光纳米、一维二维纳米材料;以及实验室技术定制单品:高分子、PROTAC技术、ADC偶联、微环境响应定制、环状/响应性染料、静电纺丝、离子液体、水凝胶、纳米微针、纳米簇等等。温馨提示:试剂家供应产品仅用于科研,不能用于人体。

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