荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共呃双键体系化学结构的化合物，受到紫外光或蓝紫光照射时，可激发成为激发态，当从激发态恢复基态时，发出荧光。蛋白荧光标记技术利用荧光物质共价结合在目标分子的某个基团上，利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。

 

荧光标记试剂分类：在荧光标记的技术中，常用的试剂有罗丹明类和荧光素类等，其它的荧光标记试剂，还有多环芳烃的化合物、芳香杂环的化合物类以及一些稀土元素的螯合物等。

绿色荧光蛋白EGFP标记Hela细胞制备

构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的Hela细胞系.方法PCR和DNA测序鉴定pEGFP-C1真核表达质粒,采用Qiagentip500进行pEGFP-C1真核表达质粒DNA的提取和纯化;cellfectin转染Hela细胞.G418筛选,有限稀释法单克隆培养,荧光显微镜进行荧光检测EGFP的表达,采用激光共聚焦显微镜观测器检测荧光特性.

 

结果PCR和DNA测序证实pEGFP质粒结构正确;在倒置荧光显微镜下,转染24h后,部分Hela细胞可见绿色荧光,转染72h时,大约80%Hela细胞内均可见绿色荧光.加入含G418的选择性培养基进行选择性培养,选择荧光较强的Hela细胞经有限稀释,持续筛选及克隆化培养,获得稳定表达绿色荧光的Hela细胞克隆,扩大培养并传至10代以上,将此细胞株命名为Hela—EGFP.激光共聚焦显微镜观察发现:在蓝光(-395nm)激发时,Hela—EGFP细胞绿色荧光激发波长为395nm,发射峰为509nm.结论Hela—EGFP细胞株具备稳定表达EGFP的能力.