荧光标记蛋白中没有一种荧光蛋白是适合生物的，想要发出亮的荧光信号，则需要在感兴趣的系统中尝试多种蛋白质。在荧光蛋白中，绿色和红色的荧光蛋白通常是易检测的，所以应该用来标记丰度较低的蛋白质，蓝色和红外通道用于标记丰度较高的蛋白质或标记亚细胞器。

荧光蛋白是分子生物实验中常用的工具，通常用来检测细胞的生物学过程。荧光蛋白的发光原理在于其发色基团经波长的光（激发光）照射后被激活，并将能量以光能形式释放，就能在荧光显微镜下看到荧光色。但是由于能量不能全以光的形式辐射出来，所以荧光蛋白的发射光（荧光）的波长比激发光长。

绿色荧光蛋白是由238个氨基酸构成的具有自发荧光的特性的生物发光蛋白,其作为融合标签被应用于分子生物学和细胞生物学领域。随后发展的基于绿色荧光蛋白的双分子荧光互补技术由于其较好生物相容性以及不需要额外荧光标记的优势,在检测蛋白与蛋白之间相互作用,蛋白的可溶性表达方面均有着较多的应用。

基于绿色荧光蛋白的双分子荧光互补技术,在重组型绿色荧光蛋白1+10互补对自组装的基础上,开发了基于磷酸化调控的半合成荧光蛋白的免标记蛋白激酶和蛋白磷酸酶活性检测新方法。这种方法能够灵敏的检测蛋白磷酸酶PP1的活性,检测限为0.06m U/μL,以半合绿色荧光蛋白作为信号输出,操作简单、免标记、灵敏。有潜力成为一种通用的蛋白激酶活性检测。

蛋白磷酸化过程在生物体的各项生命活动过程中都有着重要作用。磷酸化过程的异常与现代很多疾病密切相关。蛋白激酶和蛋白磷酸酶作为磷酸化以及去磷酸化过程中两种重要的酶,在控制磷酸化过程中起着重要作用,因此发展新型的、免标记的蛋白激酶及蛋白磷酸酶检测手段对细胞代谢以及相应的生命过程很有价值。