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流式荧光染料的十一大分类

发布时间:2022-10-14 分享至:

流式细胞学的发展,重要的促进力量是抗体,其次就是与仪器检测能力配套的荧光染料。现有的流式荧光染料可分为以下11大类:

1、有机小分子

有机小分子其实就是FITC,有机小分子具有一致的发射光谱和较小的斯托克斯位移(激发波长和发射波长之间的差,大约为50-100 nm),光稳定好,容易与抗体偶联。

 

2、藻胆蛋白

藻胆蛋白(Phycobiliproteins)是从蓝藻、鞭毛藻等藻类中提取的大蛋白分子,例如藻红蛋白(PE)的分子量为240,000 Da。这些蛋白质具有较大的斯托克斯位移(75-200 nm),并且具有稳定的发射光谱。由于藻胆蛋白较大,因此它们在结合过程中通常具有1:1的蛋白质与荧光染料比率,因此对于定量流式细胞术非常有用。

 

藻胆蛋白家族中,除了藻红蛋白(PE)外,还有别藻蓝蛋白(APC)和苦瓜素叶绿素蛋白(PerCP)。

 

3、量子点

量子点(Qdots)是半导体纳米晶体,具有与纳米晶体尺寸密切相关的荧光发射光谱。它们适合被紫外或紫光激发,但也容易被其它激光少量激发,因此,在多参数实验中使用Qdots时,其它波长激光器的这种微小激发,却会使荧光补偿变得复杂。

 

4、高分子染料

高分子(聚合物)染料由收集光信号的聚合物链组成,可以根据聚合物链的长度和连接的分子亚基,“调节”吸收和发射特定波长的光。这些染料非常稳定,并且与藻胆蛋白具有相似的量子效率,光稳定性提高。

 

5、串联染料

串联染料将藻胆蛋白(PE,APC,PerCP)或高分子染料(BV421,BUV395)与有机小分子荧光染料(Cy3,Cy5,Cy7)化学偶联,利用荧光能量转移(FRET),形成单激光激发更多波长的发射光。

 

6、荧光蛋白

荧光蛋白经常用作基因表达的报告系统。常用的是来自维多利亚水母(Aequorea victoria)的绿色荧光蛋白(GFP)。由此衍生出CFP和YFP。

 

7、核酸染料

核酸染料结合DNA、RNA或两者均结合。它们可用于定量DNA进行细胞周期分析(如PI,7-AAD,DyeCycle Violet,DAPI),分选染色体(如Hoescht 33342, Chromomycin A3),利用侧群分析对干细胞进行分选(如Hoescht 33342)。

 

8、细胞增殖染料

用BrdU(溴脱氧尿嘧啶核苷)孵育细胞,使其掺入细胞DNA合成过程,然后用针对BrdU的抗体和DNA染料染色,便可测量细胞增殖。

 

9、细胞死活染料

细胞活力可以通过排除性染料(如碘化丙啶、DAPI)确定,也可通过染料与细胞内胺类物质的结合检测。

 

10、钙指示剂染料

钙指示剂染料与钙结合后会发生色移,可用于指示细胞激活和信号传导。常用的染料仍然是indo-1,即紫外双相钙探针。另外还有fluo-3的Blue-green calcium probes。